Product details

口蹄疫病毒Aisa1型熒光RT-PCR 檢測試劑盒

檢測方法:熒光RT-PCR

產品規格:50T

保存條件:-20℃±5℃,避光保存

有效期:12個月


  • 產品介紹

    【產品名稱】口蹄疫病毒Aisa1型熒光RT-PCR 檢測試劑盒(熒光RT-PCR法)


    【包裝規格】50T/盒


    【預期用途】

    本試劑盒適用于檢測的扁桃體、淋巴結等組織病變部與健康部交界處組織、全血等標本中口蹄疫病毒Aisa1型RNA,適用于口蹄疫病毒Aisa1型感染的輔助診斷。


    【檢驗原理】

    本試劑盒采用TaqMan探針法實時熒光PCR技術,通過設計一對禽口蹄疫病毒Aisa1型特異性引物,結合一條特異性探針,用熒光PCR技術對口蹄疫病毒Aisa1型的核酸進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。


    【試劑組成】

    名      稱

      規      格

    酶液

    50μL×1管

    FMDV-A1反應液

    1100μL×1管

    FMDV-A1陽性質控品

    200μL×1管

    陰性質控品

    200μL×1管

    備注:不同批號的試劑盒組分不宜交叉使用。


    【儲存條件及有效期】

    -20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融≤5次,有效期12個月。


    【適用儀器】

    ABI系列 、安捷倫MX3000P/3005P、Bio-Rad等系列熒光定量PCR檢測儀。


    【標本采集】

     病死或撲殺動物,取分泌物、血液、脾臟、扁桃體、腎臟和淋巴結等


    【保存和運輸】

    上述標本短期內可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過6個月,標本運送應采用2~8℃冰袋運輸,嚴禁反復凍融。


    【使用方法】

    1. 樣品處理(樣本處理區)

    1.1樣本前處理

    組織樣品:每份組織分別從3個不同的位置稱取樣品約1g,手術剪剪碎混勻后取0.5g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理鹽水后繼續研磨,待勻漿后轉至1.5mL滅菌離心管中,8000rpm離心2min,取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中;全血樣本:待血凝固后,取血清100μL于1.5mL滅菌離心管中。

    1.2核酸提取

    按照相應RNA核酸提取試劑盒進行核酸提取,核酸提取產物-20℃保存。

    2. 試劑配制(試劑準備區)

    根據待檢測樣本總數,設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照,每個測試反應體系配制如下表:

    試劑

    FMDV-A1反應液

    酶液

    用量(樣本數為N)

    19μL

    1μL

    3. 加樣(樣本處理區)

    將步驟1提取的RNA、陽性質控品、陰性質控品各取5μL,分別加入相應的反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

    4. PCR擴增(核酸擴增區)

    4.1 將待檢測反應管置于熒光定量PCR儀反應槽內;

    4.2 設置好通道、樣品信息,反應體系設置為25μL;

    熒光通道選擇: 檢測通道選擇FAM, 淬滅通道選擇NONE,參比熒光選NONE。

    4.3 推薦循環參數設置:

    步驟

    循環數

    溫度

    時間

    收集熒光信號

    1

    1 cycle

    50℃

    15min

    2

    1 cycle

    95℃

    3min

    3

    40 cycles

    94℃

    15sec

    55℃

    30sec

    5. 結果分析判

    5.1結果分析條件設定

    5.2設置Baseline和Threshold:一般直接按機器自動分析的結果分析,當曲線出現整體傾斜時,根據分析后圖像調節Baseline的start值(一般可在3~15范圍內調節)、stop值(一般可在5~20范圍內調節),以及Threshold的Value值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結果。

    5.3結果判斷

    陽性:檢測通道Ct值≤35.0,且曲線有明顯的指數增長曲線。

    可疑:檢測通道Ct值>35.0,且出現典型擴增曲線的樣本建議重復試驗,重復試驗結果出現Ct值≤35.0和典型擴增曲線者為陽性,否則為陰性。

    陰性:樣本檢測結果無Ct值且無明顯的擴增曲線。

    6. 質控標準

    陰性質控品:無明顯擴增曲線或無Ct值顯示;

    陽性質控品:擴增曲線有明顯指數生長期,且Ct值≤30;

    以上條件應同時滿足,否則實驗視為無效。

    7. 檢測方法的局限性

    ? 樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關;

    ? 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現假陽性結果;

    ? 陽性對照、擴增產物泄漏,會導致假陽性結果;

    ? 病原體在流行過程中基因突變、重組,會導致假陰性結果;

    ? 不同的提取方法存在提取效率差異,會導致假陰性結果;

    ? 試劑運輸,保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現假陰性或定量檢測不準確的結果;

    ? 本檢測結果僅供參考,如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。


    【注意事項】

    ? 所有操作嚴格按照說明書進行;

    ? 試劑盒內各種組分使用前應自然融化,完全混勻并短暫離心;

    ? 反應液應避光保存;

    ? 反應中管蓋需蓋緊;

    ? 使用一次性吸頭、一次性手套和各區專用工作服;

    ? 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行,以免交叉污染;

    ? 實驗完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;

    ? 試劑盒里所有物品應視為污染物對待,并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。

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